Бактериологическая безопасность чистых зон

В медицинских и фармацевтических учреждениях лаборатории предназначены преимущественно для работы с биологическим материалом (выполнения манипуляций с патогенными биологическими агентами (ПБА), которые относятся к III либо IV группам патогенности). К ПБА относят все объекты, микробиологический материал, гельминты и микробы, которые представляют опасность для человека. Также к ПБА относят все, что вызывает подозрение на патогенность. Документ СП 1.3.2322-08 устанавливает классификацию микроорганизмов по группам патогенности. Чтобы помещения были безопасными с точки зрения распространения таких микроорганизмов, возникает необходимость их разграничить. Также для биологической безопасности важно своевременно выполнять дезинфекцию, реагировать на аварийные ситуации.

Зонирование лаборатории

При обустройстве лаборатории важно предусмотреть два входа в помещение. Один необходим для работников, другой - для передачи объектов (образцов) на проверку. Дверная конструкция обязана быть промаркирована соответствующим образом: иметь наименование лаборатории и знак «Биологическая опасность», согласно международным требованиям.

Лабораторию для манипуляций с микробиологическими объектами делят на две части:

1. «Заразная» зона. Она предусмотрена для проведения манипуляций с потенциально опасным материалом и для всех видов работ с микробами. В этой части лаборатории на всем инвентаре, включая аппараты, стеллажи и рабочие столы, обязаны стоять знаки «Биологическая опасность». Для обеззараживания этой части пространства устанавливаются бактерицидные лампы. К «заразной» зоне относят помещения, где принимается и регистрируется материал, проводятся бактериологические анализы и иммунологические исследования, ПЦР пробы. Также это комнаты, где выполняются исследования с паразитами или люминесцентная микроскопия. К «заразной» зоне относятся боксы и предбоксы, автоклавные и термостатные комнаты.
2. «Чистая» зона. Это часть помещения, где выполняются виды работ, при которых исключено контактирование с патогенными микроорганизмами. К объектам «чистой» зоны относятся туалеты, все подсобки, гардеробные, кабинеты руководителя, комнаты для приема пищи и отдыха, хранения документации. Также «чистой» зоной является помещение, где выполняется стерилизация, мойка посуды, готовятся, хранятся и разливаются среды для дальнейших посевов микроорганизмов.

Между «чистой» и «заразной» зоной необходимо предусмотреть небольшой санитарный участок. Любые объекты, посуду, инвентарь или технику из лабораторий можно выносить только после выполнения обеззараживания предметов и одобрения руководителя лаборатории.

Особенности отделки помещения лабораторий

При отделке лабораторного помещения необходимо подбирать материалы и устанавливать оборудование так, чтобы соблюдались следующие требования:

1. При создании стерильной зоны все части помещения (напольное покрытие, потолочные и стеновые панели), столы обязаны иметь гладкую поверхность для легкого мытья. Они должны быть изготовлены из материалов, которые не боятся воздействия воды, моющих средств и реагентов.
2. Пол обязан иметь нескользкое покрытие и слой гидроизоляционного материала.
3. Монтаж радиаторов в «заразной» зоне делают таким образом, чтобы от стен было достаточное расстояние для проведения обработки обеззараживающими реагентами.
4. В «заразной» зоне дверная конструкция монтируется герметично с запорными устройствами.
5. Если помещение находится на нижнем этаже, то окна комплектуют решетками так, чтобы соблюдать нормы пожарной безопасности.

Для создания комфортных условий и защиты аппаратов от солнечных лучей на окнах разрешено устанавливать жалюзи либо оклеивать их пленкой при условии, что такая защита выполнена из материалов, способных выдерживать многократную обработку дезинфицирующими реагентами.

Какое должно быть оборудование

Для формирования безопасности в отношении патогенных микроорганизмов применяется оборудование различных видов:

1. Чистые зоны с ламинарным потоком. Для их создания большое значение имеет формирование более высокого давления воздуха по сравнению с окружающими помещениями. Поступающего воздуха должно быть на 20-30% больше, нежели того, что отводится. Воздушные потоки должны перемещаться однонаправленно, строго ламинарно, без малейших завихрений. Только в этом случае частицы с опасными элементами будут удаляться из помещения потоками воздуха.
2. Вытяжные шкафы. Они предназначены для удаления загрязненного воздуха из рабочего пространства, а вместе с ним и запахов, газообразных соединений. Для обеззараживания вытяжных шкафов используется обработка бактерицидными облучателями.

Применение таких автономных систем гарантирует создание безопасных в плане микробиологии зон.

Как происходит транспортировка материала

Образцы для проведения анализов в лаборатории должны транспортироваться в ёмкостях, на которых есть знак международного образца «Биологическая опасность». Для перевозки применяют:

• контейнеры закрытого типа;
• специальные боксы;
• сумки-холодильники.

Потенциально опасный материал для исследований в обычных ёмкостях хозяйственного назначения транспортировать в лабораторию запрещено. Днище бокса либо контейнера должно быть выстлано слоем с адсорбирующими свойствами. Для этих целей подходит вата, ткань, салфетки из марли. Все перевозимые жидкости должны поставляться в емкостях с крышками таким образом, чтобы исключить возможность самопроизвольного открытия и разлива жидкости. Для перевозки пробирок применяются штативы.

Сопроводительная документация помещается в отдельный пакет из полимерных материалов для предотвращения соприкосновения с патогенным объектом. При приеме образцов специалисты лаборатории обязаны использовать маски, респираторы, защитные перчатки и другие средства защиты.

Особенности обращения с патогенными образцами

Любые работы в «заразной» зоне лаборатории - это всегда риск заражения, поэтому все манипуляции с биологическими объектами необходимо выполнять только в средствах индивидуальной защиты и с осторожностью. Чтобы отобрать часть пробы, запрещено переливать жидкости из пробирки в пробирку. При применении пипеток обязательно использование груш из резины либо автоматических устройств для втягивания жидкости в пипетку. При проведении манипуляций с ПБА запрещено уходить с места работы до конца проведения анализа. Ни в коем случае нельзя выливать отходы в бытовую канализацию без выполнения их обработки дезсредствами.

Те работы, что связаны с патогенными микробами и представляют угрозу для внешней среды и работников лаборатории, проводятся в специальных боксах с классом безопасности ІІ либо в пределах боксированных помещений «заразной» зоны. К таким видам работ относятся:

• обработка образцов с ПБА на центрифуге, что может привести к образованию аэрозолей;
• получение суспензий;
• манипуляции с лиофилизированными микроорганизмами;
• создание коллекции ПБА;
• изучение, идентификация, выделение штаммов микроорганизмов;
• серологический анализ, ПЦР определение материала для выявления возбудителей опасных инфекций (ВИЧ, гепатит В и С).

После получения образцов в закрытых ёмкостях, их открывают и разбирают, соблюдая нормы безопасности. На столе помещают лотки, выстланные материалом, который пропитан обеззараживающими средствами. На них устанавливают доставленные образцы.

От начала и до окончания всех манипуляций с патогенным материалом в боксе створка двери обязана быть герметично закрыта, персоналу запрещается выходить. До начала работ с ПБА в боксе включают вентиляцию, проводят проверку оборудования и наличия дезинфицирующих растворов. Все работы с опасными материалами проводятся так, чтобы они находились на лотках с подложкой, которая пропитана средствами для обеззараживания, а сами поддоны были установлены ближе к задней стенке бокса.

Когда работы проведены, передняя стенка бокса опускается, включаются лампы для его дезинфекции. Образцы с ПБА убираются в холодильные или термостатные камеры на хранение. Если использовались культуры микроорганизмов из коллекции, то после окончания работ хранилища опечатываются. В завершение персонал выполняет обработку дезраствором рабочих столов, бокс «заразной» зоны закрывается, опечатывается.

Для гарантии защиты от ПБА специалистов лаборатории и внешней среды, боксы должны проходить регулярную проверку на эффективность. Такое обследование выполняют:

• после монтажных работ, подготовки оборудования к эксплуатации;
• после выполнения ремонта, перестановки;
• 1 раз в год или более, если в аппаратах предусмотрены фильтры для удаления крупных частиц из воздуха;
• 2 раза в год или более, если в аппаратах нет фильтров для предварительной очистки воздушных потоков от аэрозолей с крупными частицами.

При анализе защитной эффективности боксов биологической безопасности определяют работу фильтрующих элементов, скорость перемещения потоков воздуха в рабочей зоне бокса.

Требования по дезинфекции

Для профилактики инфекций должна выполняться дезинфекция помещения, инвентаря. Для этого в лабораториях используют химические или физические способы обеззараживания. Выбор метода зависит от объекта:

1. Для обработки одежды сотрудников, лабораторной посуды и посевов материала, жидких отходов до утилизации можно применять стерилизаторы, которые работают с применением пара.
2. Стерилизаторы воздушного типа подходят для дезинфекции посуды, инвентаря, изготовленного из стекла, силикона или металла, которые не имеют следов органических веществ.
3. Химические реагенты необходимы для обеззараживания одежды персонала, рабочих поверхностей, аппаратов, мебели и отработанных жидкостей. Для химической стерилизации стоит выбирать реагенты, которые обладают широким спектром воздействия на ПБА. Отходы и объекты, содержащие кровь, подлежат обеззараживанию с применением растворов, которые эффективны против парентеральных инфекций.

Оборудование для стерилизации и эффективность проведения обеззараживания должны контролироваться следующими способами:

1. Стерилизацию паром и воздухом контролируют при помощи термометров, которые установлены в контрольных точках, в зависимости от объема камеры.
2. Паровые стерилизаторы проверяются с применением мановакуумметров.
3. Термическая обработка проверяется с применением химических методов контроля и тестовых индикаторов. Количество точек для проверки определяется с учетом объема и типа аппарата.
4. После монтажа оборудования, выполнения ремонтных работ, а также два раза ежегодно стерилизаторы должны проходить проверку с использованием бактериологических способов. Биотесты с жизнеспособными возбудителями устанавливаются в контрольных точках. Если оборудование работает исправно, они должны погибнуть.

Рабочие растворы для обработки лаборатории хранятся под вытяжкой. Они обязаны иметь маркировку с наименованием и назначением реактивов, содержанием активных компонентов, датой приготовления и окончанием применения. Реагенты, которые используются для уборки, кроме обеззараживающих характеристик, должны иметь моющую способность.

Особенности текущей и генеральной обработки:

1. Текущая обработка в помещении для проведения анализов должна проводиться 2 раза в день с обработкой напольного покрытия, мебели и аппаратов, дверных конструкций, подоконников.
2. Генеральная обработка проводится минимум 1 раз в 30 дней. При генеральной уборке мытью и дезинфекции в обязательном порядке подлежат стены на уровне до 200 см, пол с плинтусами, двери и окна, а также вся аппаратура.

Инвентарь для «чистой» и «заразной» зоны обязан быть разным, он маркируется соответствующим образом. После влажной уборки происходит обеззараживание помещения при помощи бактерицидных облучателей, согласно инструкции на конкретную модель. Посуду и небольшие изделия обеззараживают полным погружением в растворы. Разборные изделия дезинфицируют по частям. Чтобы обрабатывать в течение дня большое пространство в экстренном порядке, важно иметь запас готовых растворов для дезинфекции, которые обладают большим временем воздействия и выпускаются в удобном виде (спреи, салфетки).

Правила утилизации отходов

В «заразной» зоне отходы считаются опасными в эпидемиологическом отношении, относятся к классу Б и подлежат обязательному обеззараживанию. Отходы в твердом состоянии собираются в специальные пакеты желтого цвета, проходят обеззараживание физическими способами либо химическими реагентами. Жидкости выливать в канализацию общего назначения без стерилизации запрещается. Для их дезинфекции используют специальные растворы. Добавлять реагенты следует в количестве, прописанном изготовителем в инструкции на конкретную марку реактива. Посуда подлежит обработке паром в автоклаве.

Для обеззараживания пробирок с частицами крови должны применяться реактивы. Вытряхивать их запрещено. Чтобы провести дезинфекцию таких пробирок с остатками крови методом погружения, применяется анатомический пинцет. Погружать в раствор нужно осторожно, так, чтобы не образовывались большие пузыри воздуха. Для этого пробирку окунают под наклоном.

Правила безопасности и устранение аварийных ситуаций

Лаборатория обязана быть укомплектована пожарной сигнализацией, иметь средства для тушения пожара. Весь персонал должен иметь средства личной защиты: костюмы и халаты, шапочки, специальную обувь, перчатки, маски и респираторы. Для нахождения в боксах применяется отдельный халат, специальная обувь (тапочки). Совместное хранение рабочей и повседневной одежды является нарушением правил безопасности. Рабочая одежда меняется 1 раз в неделю либо по необходимости. Она сначала проходит обеззараживание, затем централизованно стирается.

После выполнения исследований патогенных объектов, при перемещении из «заразной» в чистую зону, после уборки либо дезинфекции помещения, персонал обязан проводить обработку рук антисептиками. Вещества нужно применять такие, которые не провоцируют раздражение кожи.

Аварии в лабораториях

Аварии подразделяют на три типа:

1. С разбрызгиванием ПБА. В этом случае образуется аэрозоль. Такие аварии происходят при разбивании пробирок или чашек Петри с колониями микробов, емкостей с жидкостями. Это любые случаи, когда ПБА попадают в воздух и на окружающие предметы.
2. Без разбрызгивания ПБА. Менее опасные ситуации, когда происходит касание петлей предметов, трескается чашка Петри, после обжига петли на стол падает нагар и т.д.
3. Авария, когда есть повреждения кожных покровов персонала. Сюда относятся порезы и проколы кожи.

Для таких аварийных ситуаций, когда есть риск инфицирования персонала либо попадания ПБА во внешнюю среду, должен быть разработан алгоритм действий для устранения последствий. В лаборатории обязан быть для таких случаев запас дезрастворов.

План действий при разбрызгивании ПБА:

1. Работа в боксе останавливается. Персонал задерживает дыхание и покидает заразную зону, переходит в предбокс, закрывает наглухо дверь. После этого включается аварийная сигнализация, руководитель лаборатории информируется об аварии.
2. Персонал проходит обработку. Для рук используется антисептик. Если работа велась без масок, то для обеззараживания лица применяется этанол с концентрацией 70%. Рот также обрабатывается этанолом. Слизистые глаз и носа промываются раствором борной кислоты 1%.
3. Рабочая одежда снимается, дезинфицируется при помощи раствора либо обеззараживается в автоклаве.
4. Все открытые поверхности тела персонала обтираются 70% раствором этанола. Нос и глаза закапывают антибиотиком, эффективным против возбудителя, с которым велись работы. После этого персонал принимает душ, используется чистый комплект одежды.
5. Параллельно с этим происходит ликвидация аварии другим персоналом. Сотрудники используют бахилы, противочумные халаты, респираторы и иные средства защиты.
6. Дезинфекция бокса осуществляется с применением гидропульта и распыления дезраствора, который губителен для возбудителя. Обеззараживание помещения начинают от двери, постепенно продвигаясь по всему боксу. Орошению подлежат все аппараты, мебель и воздух.
7. Спустя 120 минут после проведенной дезинфекции собираются осколки посуды, они обеззараживаются погружением в специальный раствор. Пробирки и чашки с посевами, которые были в боксе во время возникновения аварийной ситуации, сначала обрабатывают дезраствором, затем отправляют в автоклав.
8. После этого помещение обрабатывается при помощи бактерицидных облучателей. Через 2 часа возможны влажная уборка с использованием дезинфицирующих растворов и возобновление работы.

В случае, когда разбрызгивание ПБА не произошло, достаточно включить аварийную сигнализацию, выполнить обработку обеззараживающими реактивами рабочей поверхности, а затем помещения. Специалисты после этого снимают и дезинфицируют одежду, обрабатывают кожу антисептиком.

Если же случилась авария с порезом или проколом кожи, то также включается аварийная сигнализация. Персонал снимает перчатки, моет руки с мылом, обрабатывает их 70% этанолом, а саму рану 5% раствором йода.

Каждый год в лаборатории обязаны проходить учения и тренировки, отрабатываться алгоритмы устранения последствий аварийных ситуаций.

Особенности допуска специалистов к ПБА

Для разрешения персоналу работать с ПБА, а также для допуска инженеров и техперсонала к ремонтным и монтажным работам, издается приказ главного врача. Его периодичность – один раз в 24 месяца.

Допуск персонала:

1. К работе с патогенными микробами групп III и IV допускаются лица не младше 18 лет.
2. Персонал должен иметь высшее либо среднее образование: биологи, медики, микробиологи и т.д. Лица обязаны проходить необходимую подготовку перед допуском.
3. Все, кто работает с патогенными агентами, обязаны проходить вакцинацию по календарю прививок с учетом эпидемиологических показаний.
4. Персонал, который имеет противопоказания к прививкам, к терапии специальными препаратами, не может использовать СИЗ, не допускается к работам с ПБА.
5. Ежегодно весь персонал обязан проходить инструктаж по технике безопасности. Технический персонал и инженеры, санитарки обязаны пройти вводный и периодический инструктаж.

Автоклавами могут пользоваться только лица, которые прошли обучение и получили допуск, имеют удостоверение на право использования сосудов, работающих под давлением. Перед приемом сотрудников лаборатории на работу они обязаны пройти медосмотр для обнаружения противопоказаний к данному виду трудовой деятельности.